Eğitim Dünyası
DNA İzolasyonu Nasıl Yapılır?
DNA İzolasyonu
- 400 pl kan ependorf tüpüne konur, üzerine 1000 µl distile su pipetle eklenir ve 5 dakika iyice çalkanır.
- 10 dakika 3500 devirde santrifüj edilir.
- Üsteki sıvı dikkatlice pipetle çekilerek atılır.Çökelti üzerine 1000 µl distile su pipetle eklenir ve iyice çalkalanır.
- 10 dakika 3500 devirde santrifüj edilir.
- Üstteki sıva dikkatlice pipetle çekilerek atılır. Çökelti üzerine 250 µl nuklei lizis buffer, 20 µl %10’luk Sodyum Dodesil Sülfat ve 20 µl Proteinaz K eklenir ve tüp alt üst edilerek çalkalanır.
- Ependorf tüp 72° C’deki su banyosunda 10 dakika bekletilir.
- Ependorf tüpe 175 µl amonyum asetat eklenir ve 30 saniye çalkalanır.
- Oda ısısında 15 dakika bekletilir.
- 4500 devirde 20 dakika santrifüj edilir.
- Üstteki sıvı bir diğer ependorf tüpüne alınır ve üzerine 2 katı oranında absolu etanol
- Ependorf tüpü yavaşça alt üst edilir. DNA’nın belirmesi gözlenir.
- 13000 devirde 10 dakika santrifüj edilir.
- Üstteki sıvının tümü pipetle alınır üzerine 250 µl % 75 etanol ilave edilir.
- 13000 devirde 10 dakika santrifüj edilir.
- Üstteki sıvının tümü pipetle alınır. DNA havada kurutulur ve üzerine 250 µl distile su veya Tris-EDTA ilave edilerek DNA çözülür.